近年來，免疫治療經(jīng)歷了一系列突飛猛進的發(fā)展，以特異性過繼免疫細胞療法及免疫檢查點抗體療法為代表的新型免疫治療技術(shù)因其在臨床研究中取得的顯著療效而成為學(xué)術(shù)界和產(chǎn)業(yè)界共同關(guān)注的焦點。其中，嵌合抗原受體T細胞免疫療法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T療法）因其在白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等病種的治療中展現(xiàn)出顯著的治療效果而成為國內(nèi)外研究的熱點。隨著我國對CAR-T技術(shù)的研究不斷深入，國內(nèi)企業(yè)的積極布局和產(chǎn)業(yè)鏈的延伸，我國的CAR-T細胞治療技術(shù)也在緊隨趨勢的發(fā)展。

原材和輔料及其質(zhì)量控制

1、在CAR-T細胞產(chǎn)品的原材料和輔料通常都要考慮哪些因素？

       生產(chǎn)CAR-T細胞產(chǎn)品的原材料是指生產(chǎn)過程中所用的所有生物原材料和化學(xué)原材料，它們不是CAR-T細胞產(chǎn)品的目標(biāo)組成成份，如培養(yǎng)基、PBMC分離試劑、T細胞分選試劑、激活劑、細胞因子(如IL-2、IL-7及IL-15)、血清或血清替代物等。而CAR-T細胞產(chǎn)品的輔料是指其產(chǎn)品配方中所使用的輔助材料，是其細胞產(chǎn)品中的成份，如人血白蛋白、人血小板提取物、凍存液(如DMSO)等。

       一個完整CAR-T細胞產(chǎn)品的制備過程包括基因載體物質(zhì)的制備及CAR-T細胞終產(chǎn)品的制備兩個大的生產(chǎn)環(huán)節(jié)，同時，載體物質(zhì)的制備又包括質(zhì)粒載體制備和/或病毒載體制備工藝過程，因此，在考慮選擇原材料時，不僅要考慮CAR-T細胞產(chǎn)品制備過程中所用的原材料，也要考慮基因載體物質(zhì)制備過程中所用的原材料(不包括生產(chǎn)的起始原材料，如細胞基質(zhì)和菌毒種)，如細菌及細菌培養(yǎng)基、牛血清、添加因子、轉(zhuǎn)染試劑(如鈣轉(zhuǎn)試劑、PEI、Lipo2000等)以及核酸酶等等。如果在CAR-T細胞產(chǎn)品生產(chǎn)過程中還使用了自制的試劑和材料，還要考慮制備這些自制試劑中的原材料。

       在早期的基礎(chǔ)研究時，研究者對原材料及輔料的關(guān)注可能不足，但由于原材料和輔料對產(chǎn)品的質(zhì)量及安全性均有重要影響，因此，一旦準(zhǔn)備進入產(chǎn)品開發(fā)階段，研發(fā)人員就要盡早開展原材料及輔料的評估及篩選，而且在臨床過程中要進一步開展相關(guān)的研究，在確證性臨床前應(yīng)完成充分的質(zhì)量評估工作。

2、轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染T細胞的病毒載體/質(zhì)粒載體是否可按照原材料管理？

       CAR-T細胞是基因治療的ex vivo方式，通過病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染，將CAR基因轉(zhuǎn)入T細胞中從而獲得CAR-T細胞，雖然它們未轉(zhuǎn)染的部分在后續(xù)的T細胞擴增及洗滌過程中經(jīng)驗證可被去除，但其所攜帶的遺傳物質(zhì)則是CAR-T細胞的重要組成部分且是使T細胞具有腫瘤殺傷活性的重要基礎(chǔ)，這一點與生產(chǎn)中所用的原材料的特性*不同，其質(zhì)量對CAR-T細胞具有重要影響，因此，轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染T細胞的病毒載體/或質(zhì)粒載體按照產(chǎn)品的理念進行管理更為合理。

      但同時也還需要考慮到，也正是因其不直接進入患者體內(nèi)，在后續(xù)的細胞擴增及CAR-T制劑工藝中會有稀釋或洗滌步驟，因此，通過驗證可證明后續(xù)工藝可以降低其殘留的風(fēng)險，則可以結(jié)合工藝驗證的結(jié)果制定更為合理的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

3、如何進行原材料和輔料的選擇和風(fēng)險控制？

       在CAR-T細胞制備過程中使用的原材料有藥用級別的(如IL-2)，也有非藥用級別的(如IL-7)；有的原材料在國外被批準(zhǔn)用于藥品生產(chǎn)，但尚未在國內(nèi)獲得注冊，如某種CD3/CD28磁珠；有的同一種試劑分別存在藥用級別和非藥用級別，非藥用級又分為GMP級別及研究用級別；有的試劑是生物源性材料，如病毒制備中會用到的牛血清和胰酶；有的試劑甚至要自行制備等，面對如此復(fù)雜的情況，CAR-T細胞產(chǎn)品的研究者就需要考慮采用何種方法選擇以及控制原材料。

原材料的選擇是基于風(fēng)險評估的原則，通常會有以下幾種考慮：

     (1) 在產(chǎn)品研發(fā)早期就開始設(shè)計所用原材料的類別并分析其可能的風(fēng)險，可根據(jù)我國現(xiàn)行版《中國藥典》三部中“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程”及國外相關(guān)技術(shù)要求對原材料的風(fēng)險等級進行評估并分類，同一種試劑或材料，優(yōu)先選擇低風(fēng)險級別的，如藥用無菌制劑優(yōu)于藥用制劑，藥用級優(yōu)于非藥用級、GMP級優(yōu)于非GMP級、非動物源性優(yōu)于動物源性材料等；

     (2) 根據(jù)對每一種原材料風(fēng)險評估的結(jié)果建立相關(guān)的質(zhì)量檢測項目、檢測方法及放行標(biāo)準(zhǔn)，并在產(chǎn)品研發(fā)過程中不斷分析關(guān)鍵原材料質(zhì)量對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，并不斷改進關(guān)鍵原材料的質(zhì)量要求。

     (3) 對于研究級別的生物源性的原材料，不僅要設(shè)置它們的安全性質(zhì)控項目，如無菌、內(nèi)毒素、支原體、分枝桿菌及外源病毒污染的檢測等，還要考慮它們的純度、效價或?qū)毎罨?、增殖的生物學(xué)效力的質(zhì)控項目。動物源性材料的質(zhì)量控制，如牛血清，需至少按照已有的國家標(biāo)準(zhǔn)或要求進行原材料質(zhì)控及放行；

     (4) 對于自行研制的原材料，如某種特殊要求的細胞因子，不僅需要建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，還需要有制備工藝及其工藝驗證等數(shù)據(jù)支持，有的高風(fēng)險的原材料甚至可能還會要求開展動物體內(nèi)的安全性評估。此類原材料的檢測要求需要根據(jù)其使用方式、下游工藝的清除驗證數(shù)據(jù)以及潛在風(fēng)險來確定。

      輔料的選擇及控制要求同樣是基于風(fēng)險評估的原則，因輔料是與CAR-T產(chǎn)品一同進入患者體內(nèi)，因此，選擇低風(fēng)險的輔料以及嚴(yán)格控制輔料風(fēng)險是基本原則，如一種輔料同時存在幾種風(fēng)險等級來源時，應(yīng)選用風(fēng)險等級低的輔料；對于高風(fēng)險等級的輔料，應(yīng)在產(chǎn)品研發(fā)的早期評估使用這些輔料的必要性，并尋找其他替代物或替代來源。

4、在載體物質(zhì)或CAR-T細胞終產(chǎn)品中是否需要進行原材料殘留的質(zhì)量檢測？

       在載體物質(zhì)或CAR-T細胞終產(chǎn)品中是否進行原材料的殘留控制，主要考慮兩個方面，一個是根據(jù)原材料的風(fēng)險級別，評估載體純化工藝或CAR-T細胞制備工藝對其去除能力，二是對于風(fēng)險高的原材料除了評估去除能力外，還需要在載體或CAR-T細胞產(chǎn)品制備的適工藝階段或終產(chǎn)品終進行殘留量檢測的控制并建立控制標(biāo)準(zhǔn)，如慢病毒工藝中使用的降解DNA的核酸酶Benzonase的殘留控制，牛血清白蛋白殘留量的檢測等。

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