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技術(shù)文章

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細胞的凍存和復蘇實驗用試劑一、原理在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細胞復蘇時速度要快，使之迅速通過細胞zui易受損的－5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿...

2016 1-20
細胞培養(yǎng)過程中的注意事項及試劑配制一.常用設備準備室的設備：單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品規(guī)（放置消毒過的物品）、包裝臺。配液室的設備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。培養(yǎng)室的設備：液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）。必須放在無菌間的設備：離心機（收集細胞）、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、...

2015 12-23
細胞凍存解決方案細胞凍存解決方案細胞凍存步驟：1.預先配制凍存液：10%DMSO+90%胎牛血清，4℃冰箱保存預冷；2.用胰酶對細胞進行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細胞（盡可能溫和）；3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細胞，將預冷的凍存液加入消化*的細胞中，用滴管輕輕吹打混勻。4.在每支凍存管中加入1ml細胞液，密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期。5.凍存步驟的細致直接關(guān)系到細胞復蘇時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐）；或者...

2015 12-8
神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基自然篩選法多年的研究使神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)，體外擴增等技術(shù)日臻完善?，F(xiàn)在科學家們已克隆了人體的神經(jīng)干細胞，并將其在體外培養(yǎng)，擴增。zui近，有研究又將人的神經(jīng)干細胞成功地植入了胚胎鼠腦中，這些干細胞研究在人體的應用，使其從實驗室逐步走向了臨床，為人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供了一個全新的視角。神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因?qū)胫委熑缜八?，癌基因轉(zhuǎn)染干細胞形成的永生細胞系不僅可以成功地整合于植入部位，而且可以穩(wěn)定地表達轉(zhuǎn)染的外源性基因，這就為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基因治療提供了一個性能*的載體。利用溫度敏感性...

2015 10-28
心肌細胞分化培養(yǎng)基的作用由于人類心臟電生理學特性，其心肌細胞的去極化時程與嚙齒類動物差異很大。例如，人心臟生理條件下每分鐘搏動60-90次，而小鼠為500-700次，大鼠為300-400次。因此，在小動物心肌細胞模型中發(fā)現(xiàn)的理論，當需要進一步在驗證時，由于缺失人類心肌系統(tǒng)，只能取用其他大型哺乳動物的原代分離心肌細胞替代。而這些細胞的來源都不穩(wěn)定，實驗結(jié)果的重復性也無法保證。由于*的原因，基本沒有可能獲得并培養(yǎng)原代人心肌細胞，以心肌細胞為代表的心肌細胞，是目前和將來*的人源心肌細胞來源。心肌細胞可以極...

2015 10-27
心肌細胞培養(yǎng)基的廣泛應用心肌細胞，是目前和將來*的人源心肌細胞來源。由于人類心臟的生化和分子生物學特性，其心肌細胞的很多核心功能蛋白與小鼠等模式動物不同。例如，小鼠心肌細胞主要表達α重鏈肌球蛋白，以適應高頻率的搏動，而人類心肌細胞主要表達β重鏈肌球蛋白，適應低頻率的搏動。此外，以Ito和Ik為代表的鉀離子通道在不同種屬動物及人類心肌細胞間的表達和功能差異極大，對于動作電位形成的貢獻也各不相同。傳統(tǒng)研究采用的心肌細胞,主要是采用從新生或成年動物心臟分離獲得的原代心肌細胞。同時，此類細胞還存在:分離技術(shù)...

2015 10-19
干細胞無血清培養(yǎng)基有什么優(yōu)缺點干細胞無血清培養(yǎng)基和試劑在培育無脊椎動物和哺乳動物細胞來備置單克隆抗體方面被廣泛的應用，還有病毒抗原和重組蛋白等。無血清培養(yǎng)基是不用增加血清就能夠保持細胞在體外比較長時刻成長繁衍的組成培養(yǎng)基。大部分的干細胞無血清培養(yǎng)基擁有向細胞中轉(zhuǎn)輸離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)理葡萄糖攝取量的胰島素，還有一部分蛋白質(zhì)和清蛋白，纖維蛋白，胎球蛋白等，綜上所指的蛋白在細胞培育中具有各自不一樣的功用，如供給細胞貼壁所要的基質(zhì)，抗生物反應器剪切力，供給細胞貼壁所需的基質(zhì)，作為脂類和其他生長因子的載體等。干細胞...

2015 8-26
神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基的作用神經(jīng)干細胞是具有多潛能性的細胞，它具有分化成有限細胞類型和構(gòu)建組織的能力。目前已知，神經(jīng)干細胞在體外特定的條件下可被誘導分化為神經(jīng)元細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞。筆者在試驗時曾取小鼠中腦神經(jīng)干細胞在體外進行誘導分化，為證實其多分化潛能，在撤掉絲裂原并加入血清分化1周后，對細胞進行免疫組織化學鑒定，發(fā)現(xiàn)分化的細胞中有神經(jīng)元特異性烯醇化酶、膠質(zhì)纖維酸性蛋白、和小膠質(zhì)細胞特異性抗原標志Gal-C陽性緗胞。此三種細胞已成為鑒定神經(jīng)干細胞分化能力的特異性指標。目前，神經(jīng)干細胞的分離...

2015 8-20

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